去除致癌基因的EB病毒潜伏膜蛋白1的重组腺病毒的构建及其免疫效果

• 作者: 周玲 左建民 曾毅 王琦 贾俊岭
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: EB病毒 重组腺病毒 EB病毒潜伏膜蛋白1△ 特异性细胞毒作用
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 人与动物病毒
• 页码范围: 245-248
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9|Q78
• 字数: 3319字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2003.03.011

摘要

为进一步研究利用EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)进行免疫治疗的可行性,构建了含有去除致癌基因的EB病毒LMP1片段(LMP1△)的穿梭质粒pAdTrack-CMV-LMP1△,将它与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电转染的方法共同导入大肠杆菌BJ5183中,在宿主菌重组酶的介导下进行同源重组.通过抗性筛选,获得含有重组腺病毒基因的质粒;然后再通过脂质体将重组腺病毒质粒导入腺病毒包装细胞HEK293细胞中,在HEK293细胞E1蛋白的反式作用下,病毒被包装.将包装病毒的细胞裂解上清进行PCR鉴定证实,病毒DNA中含有目的基因的特异性片段.RT-PCR证明了外源基因在真核细胞中得以转录,免疫酶和Western blot的结果也显示,LMP1△蛋白在真核细胞得到表达.将扩增后的病毒感染HeLa细胞,测定病毒滴度为3.0×109PFU/ml.为初步探讨其免疫效果,采用肌肉注射和滴鼻的方式感染Balb/c纯系小鼠,免疫酶检测其特异性抗体,LDH法检测特异性CTL的杀伤作用,结果发现,两种免疫途径均可诱发小鼠针对LMP1的特异性体液免疫和细胞免疫,而且Ad5作为免疫对照组的小鼠则没有引起相应的免疫反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周玲	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	40	192	8.0	12.0
2	曾毅	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	104	686	13.0	23.0
3	贾俊岭	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	1	2	1.0	1.0
4	左建民	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	7	32	4.0	5.0
5	王琦	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	8	228	4.0	8.0