幽门螺杆菌临床菌株flaB基因的克隆和表达及鉴定

• 作者: 严杰 梁韶晖 毛亚飞
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 螺杆菌,幽门 flaB基因,碱基序列 克隆,分子 FlaB融合蛋白/免疫学
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R377|R392.2
• 字数: 2375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2003.01.004

摘要

目的:克隆幽门螺杆菌(Hp)鞭毛素B基因(flaB),构建其原核表达系统,鉴定融合蛋白免疫性.方法:采用高保真PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株Y06中扩增flaB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET32a的flaB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,采用Hp全菌抗体的Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性.ELISA检测125例胃、十二指肠粘膜活检标本尿素酶阳性患者血清中FlaB抗体和41株Hp临床菌株FlaB表达.结果:所克隆的flaB基因与报道的相应核苷酸序列同源性为96.31%～97.73%,氨基酸序列同源性高达99.41%～100.00%.pET32a-flaB-BL21DE3系统的FlaB融合蛋白表达量为细菌总蛋白的40%左右.FlaB融合蛋白能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔能获得高效价抗体.结论:本研究成功地构建了Hp flaB高效原核表达系统,所表达的FlaB融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性;Hp临床菌株FlaB表达率高,且能刺激机体产生抗体.FlaB可作为Hp疫苗及诊断试剂盒的抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
3	梁韶晖	浙江大学医学院病原生物学教研室	1	5	1.0	1.0