幽门螺杆菌47kDa微孔蛋白基因的克隆表达及特性鉴定

• 作者: 李良菊 王华 邵世和 郝渭滨 鞠小丽
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 外膜微孔蛋白 原核表达原载体 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 805-808,828
• 页数: 5页
• 分类号: R378.4
• 字数: 3498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.08.016

摘要

目的 对人幽门螺杆菌(H.pylori)编码47kDa外膜微孔蛋白基因omp47克隆表达及特性鉴定,探索研制H.pylori疫苗的新途径.方法 培养和收集H.pylori标准菌株NTTC11637及临床菌株,采用酚∶氯仿抽提、纯化基因组DNA.设计上下游引物,并以该基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增omp47基因片断.将目的基因和与克隆载体PGEM-T连接后,转化至E.coli DH5α及BL21,碱裂解提取质粒经BamHI和XhoI双酶切鉴定并进行序列分析.重组蛋白采用IPTG诱导表达后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定、镍亲和层析纯化检测抗原活性.结果 经酶切、测序分析表明,插入的基因片断为1 284bp,编码427个氨基酸.与GenBank公布的H.pylori标准株26695、43504及J99序列比对,核苷酸同源性高达94%～96%,编码氨基酸同源性96%～99%.经SDS-PAGE检测,电泳图谱上显示一条相对分子量为47kda的新生蛋白带.Western blot检测表明重组蛋白有较好的抗原性. 结论成功克隆了外膜微孔蛋白OMP47的编码基因,为H.pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华	江苏大学医学技术学院病原生物学教研室	60	228	7.0	12.0
2	邵世和	江苏大学医学技术学院病原生物学教研室	99	382	9.0	14.0
3	李良菊	江苏大学医学技术学院病原生物学教研室	17	60	4.0	7.0
4	鞠小丽	江苏大学医学技术学院病原生物学教研室	13	28	3.0	5.0
5	郝渭滨		4	0	0.0	0.0