恙虫病东方体Karp株56kDa与47kDa外膜蛋白基因的嵌合和嵌合基因在大肠杆菌的表达

• 作者: 余跃飞 温博海 温博贵 牛东升 邱玲 陈梅玲 高宁 魏文进
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恙虫病东方体 外膜蛋白 基因重组 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 675-678
• 页数: 4页
• 分类号: R376+.2
• 字数: 2387字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.08.006

摘要

目的将恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)Karp株的56kDa和47kDa外膜蛋白基因嵌合,并使嵌合基因在大肠杆菌细胞内表达,产生双抗原融合蛋白.方法采用PCR方法,从Ot Karp株基因组DNA中扩增56kDa蛋白基因片段,将该片段分别与原核表达载体pQE30及47kD蛋白基因重组质粒 pQE30/47连接,构建pQE30/56及pQE30/56-47重组质粒;用IPTG诱导转入大肠杆菌内的重组质粒的目的基因表达.结果SDS-PAGE显示,pQE30/56转化的大肠杆菌产生一约45kDa的融合蛋白和pQE30/56-47转化大肠杆菌产生一约90kDa融合蛋白(56-47融合蛋白),免疫印迹分析显示两融合蛋白均与Ot Karp株感染鼠血清产生特异性反应,56-47融合蛋白分别与47kDa、56kDa重组蛋白免疫的小鼠血清产生特异性反应,以及56-47融合蛋白免疫血清与56kDa和47kDa重组蛋白反应.结论Ot Karp 株的56kDa与47kDa外膜蛋白基因嵌合后在大肠杆菌细胞内实现了表达,表达的融合蛋白具有56kDa和47kDa外膜蛋白的抗原特性.