恙虫病东方体Gilliam株56kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

• 作者: 崔红 张雪颖 温博海 牛东升 陈唯军 陈梅玲 陈香蕊 魏文进
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 恙虫病东方体Gilliam株 PCR 56kDa基因 克隆表达 Western-blotting
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 页码范围: 279-283
• 页数: 5页
• 分类号: R513
• 字数: 2448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.04.003

摘要

目的表达恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)Gillam株56kDa外膜蛋白,探索其作为诊断抗原的可能性.方法采用PCR方法,从Ot.Glliam株菌种基因组DNA中扩增出56kDa外膜蛋白基因片段,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30,再用重组质粒转化大肠杆菌,最后用IPTG诱导转化菌,SDS-PAGE和Western-blotting检测重组质粒目的基因的表达.结果 (1)获得长约1500bp的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因,SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量5.6×104处有表达带;(2)DNA测序证明重组质粒pQE30/56中插入的基因片段的序列与已报告的Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因序列基本一致.(3)诱导表达菌体经超声破碎后,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在;(4)免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为5.6×104的独特蛋白带,该蛋白约占细菌蛋白总量的29.4%.结论 Ot.Gilliam株56kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达的重组蛋白具有免疫反应性,与Ot.Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印迹中呈阳性反应.