优化PCR条件扩增人IL-10 cDNA及其原核表达载体构建

• 作者: 何韶衡 李明才 陶爱林
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 白细胞介素10 热启动 退火温度
• 年，卷（期）: 2003,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1195-1197
• 页数: 3页
• 分类号: R394
• 字数: 3119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2003.11.004

摘要

目的:探讨PCR扩增人IL-10基因片段的最佳反应条件并构建人IL-10原核表达载体.方法:运用降落PCR扩增5'端GC含量高的人IL-10基因片段,主要对退火温度和热启动等因素进行优化选择;载体和PCR产物经拓扑TA克隆技术连接,常规方法转化、筛选阳性重组质粒.结果:PCR反应的最佳退火温度为68.5℃,此时扩增出的DNA片段大小符合预期设想,并通过菌落PCR和DNA测序得到证实.结论:在上述条件下获得的PCR产物纯度高、非特异性产物少,成功地构建了人IL-10原核表达载体.并提示降落PCR是一种潜在的一步找到最佳扩增条件的方法.