人胰腺激肽释放酶cDNA的克隆、序列分析和原核表达

• 作者: 孙怀昌 张磊 施伟庆
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人激肽释放酶 cDNA 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 169-172
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3149字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2003.02.012

摘要

为了研制人激肽释放酶(KLK1)特异单克隆抗体和进行重组酶的鉴定及纯化,根据已发表的人KLK1序列设计引物,用PCR扩增法从人胰腺单链cDNA库中特异地扩增出KLK1 cDNA.将其克隆入pGEM-T载体中,对5个重组质粒进行了序列测定,其中1个cDNA克隆的核苷酸序列与已发表的人肾/胰/唾液腺KLK1 cDNAs序列完全相同或有3个核苷酸差异.将去除信号肽序列的KLK1 cDNA以正确阅读框插入表达载体pGEX-4T-3,构建成重组质粒pGEX-KLK1.此重组质粒转化的E.coli经IPTG诱导后表达分子量为48 kDGST-KLK1融合蛋白,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在,可溶性部分能被Glutathione Sepharose 4B特异吸附,两者都能被GST特异单克隆抗体识别.用SDS-PAGE分离纯化的融合蛋白免疫小鼠,获得的抗血清的ELISA效价为1:1600.结果表明,克隆的人KLK1cDNA及其表达产物是正确的,可以用于人KLK1单克隆抗体的制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学江苏省转基因动物制药工程研究中心	138	1042	15.0	25.0
2	张磊	扬州大学江苏省转基因动物制药工程研究中心	33	388	7.0	19.0
3	施伟庆	扬州大学江苏省转基因动物制药工程研究中心	7	111	5.0	7.0