新的β2m基因打靶载体构建方法的建立

• 作者: 孟瑛 李树浓 黄绍良
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 主要组织相容性复合物 基因,β2m 基因打靶 序列分析
• 年，卷（期）: 2003,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 889-893
• 页数: 5页
• 分类号: R392.4
• 字数: 3651字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.07.006

摘要

目的:采用常规方法(同源片段的插入方向与Neo基因相同)构建载体的同时,将两条同源臂反向插入Neo基因的两侧,构建新型小鼠β2m基因替换型打靶载体β2m-pPNT,即增加3'同源臂的长度,探讨同源臂插入位置和长度变化对同源重组率的影响.方法:设计和合成引物,经PCR从小鼠β2m-pSV2/△HXgpt基因组克隆分别扩增出长度为0.8kb和4.2kb的β2m基因片段,作为5'和3'同源臂,分别反向插入载体pPNT的Neo基因上游和下游,构建小鼠β2m基因替换型打靶载体β2m-pPNT.结果:经过PCR、限制性内切酶及DNA序列测定,证实此两条同源臂包含小鼠β2m的起始区和表达区,表明载体构建成功.结论:PCR技术是构建基因打靶载体的简单而可靠方法.增加3'同源臂的长度对研究提高胚胎干细胞基因敲除的同源重组率提供新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄绍良	中山大学第二附属医院儿科	148	897	15.0	19.0
2	李树浓	中山大学中山医学院病理生理学教研室	38	248	9.0	14.0
3	孟瑛	中山大学第二附属医院儿科	3	5	2.0	2.0