丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP9的克隆化研究

• 作者: 成军 李强 梁耀东 王琳 程明亮
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 非结构蛋白NS5A 丙型肝炎病毒 反式激活 基因克隆化
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 254-256
• 页数: 3页
• 分类号: R511
• 字数: 3230字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2003.03.019

摘要

目的筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活新型靶基因,研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制.方法应用抑制性消减杂交技术(SSH)及生物信息学技术,以HCV NS5A表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列数据库的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,命名为NS5ATP9,在GenBank中注册,注册号为AF529370.结果NS5ATP9基因的编码序列全长为336个核苷酸(nt),编码产物由111个氨基酸残基(aa)组成,并成功的克隆化.结论HCV NS5A反式激活新型靶基因NS5ATP9的筛选与克隆,为进一步研究HCV NS5A反式激活作用的分子生物学机制开辟了新的研究方向.