人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达

• 作者: 徐发良 李磊 胡承香 顾长国
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组融合蛋白类 谷胱甘肽巯基转移酶 人髓样分化蛋白-2 遗传载体
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 206-208
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2885字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2003.03.007

摘要

构建人髓样分化蛋白-2(human myeloid differentiaton protein-2,hMD-2)与谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)的融合蛋白(hMD-2/GST)表达载体PGEX-4T-1/hMD-2,在大肠杆菌中融合表达hMD-2/GST.以真核表达载体PEF-BOS/hMD-2为模板,用PCR法在MD-2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子;将hMD-2编码序列克隆入原核表达载体PGEX-4T-1的相应酶切位点;用PCR和酶切筛选、鉴定重组质粒PGEX-4T-1/hMD-2,并对插入基因片断测序;重组质粒PGEX-4T-1/hMD-2转化大肠杆菌,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达产物.结果PCR、酶切鉴定和序列测定证实MD-2编码序列正向插入原核表达载体PGEX-4T-1的相应酶切位点,片断与PCR扩增产物大小相同、序列无误、阅读框架正确;SDS-PAGE证实hMD-2/GST在大肠杆菌中表达,表达量约占菌体总蛋白的30%.说明成功构建了PGEX-4T-1/hMD-2载体,hMD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达,为MD-2后续研究作了必要的准备.