人CD154-GST融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

• 作者: 宁波 张志方 张春艳 曹开源 李树浓
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人CD154 融合蛋白 基因表达 克隆 分子
• 年，卷（期）: 2000,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 673-677
• 页数: 5页
• 分类号: Q754
• 字数: 2696字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2000.08.001

摘要

目的:为制备重组人CD154-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白(hCD154-GST),用于人CD154单克隆抗体研制.方法:根据人CD154基因序列设计合成特异性引物,RT-PCR扩增人CD154基因,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1中,得到重组表达质粒pGEX-4T-1/CD154;用此重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,转化菌落经BamH Ⅰ、EcoRⅠ酶切鉴定.IPTG诱导大肠杆菌表达人CD154蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物.结果:从人外周血淋巴细胞扩增出820bp的hCD154cDNA;将其克隆至pGEX-4T-1质粒中,经双酶切鉴定及DNA序列分析证实含有目的基因;IPTG诱导后的大肠杆菌经SDS-PAGE电泳鉴定出现明显的55kD蛋白带.结论:成功构建了人CD154-GST原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出人CD154-GST融合蛋白,为人CD154单克隆抗体的研制及进一步抗排斥反应的研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宁波	中山医科大学免疫学教研室	19	92	5.0	8.0
2	李树浓	中山医科大学病理生理教研室	62	886	14.0	28.0
3	张春艳	中山医科大学免疫学教研室	10	102	5.0	10.0
4	张志方	中山医科大学生理教研室	8	31	4.0	5.0
5	曹开源	中山医科大学免疫学教研室	6	35	3.0	5.0