人釉原蛋白基因在大肠杆菌中的融合表达

• 作者: 张雪洋 王春先 章锦才 赵华 赵红宇
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人釉原蛋白 融合蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 27-30
• 页数: 4页
• 分类号: Q781
• 字数: 3385字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-1182.2008.01.008

摘要

目的 建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线.方法 利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达条件下,分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的 蛋白表达进行分析,在可溶性蛋白中发现大量目的 蛋白,随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化.结果 pGEX-4T-1/AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致.最佳诱导时间为14.5 h、最佳诱导剂浓度为1.0mmol/L、最佳诱导温度为20℃,在此条件下目的 蛋白的表达量达到峰值.在最佳诱导条件下,胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的 蛋白.提取大量胞质蛋白,经GSTrapFF亲和层析柱纯化,收集纯化液,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,显示成功纯化TAMG融合蛋白,在提取液洗涤2次后,可获得高纯度的融合蛋白.结论 利用pGEX-4T-1/AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章锦才	广东省口腔医院种植中心	113	615	12.0	18.0
2	张雪洋	广东省口腔医院种植中心	42	311	11.0	15.0
3	赵红宇	广东省口腔医院种植中心	13	53	4.0	7.0
4	赵华	广东省口腔医院种植中心	7	15	2.0	3.0
5	王春先	广东省口腔医院种植中心	11	49	5.0	7.0