人Fas配体蛋白在大肠杆菌中的融合表达与应用

• 作者: 余奇文 张冬青 张继英 李宁丽 柏峻 沈佰华 王利 聂红 马安伦
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 融合蛋白 Fas配体 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 20-22
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 2757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2003.01.007

摘要

目的: 在大肠杆菌中融合表达人Fas配体蛋白. 方法: 应用RT-PCR技术, 从激活的人外周血淋巴细胞中提取总RNA, 扩增Fas配体 cDNA, 克隆入PCR2.1载体.测序验证后, 克隆入带有组氨酸盒的表达载体pQE-31, 在大肠杆菌中表达, 经亲和层析柱纯化后, 用SDS-PAGE和Western blot 鉴定表达产物.结果: 表达的融合蛋白为人Fas配体, 其相对分子质量(Mr)为40 000.经透析复性后, 具有诱导Jurkat细胞凋亡的作用.用该蛋白分子免疫BALB/c小鼠制备抗血清, 以间接ELISA检测了部分自身免疫病与肿瘤患者血清中可溶性FasL的含量, 结果与进口试剂盒的灵敏性相似.结论: 获得人Fas配体蛋白, 并制备出抗FasL抗血清, 为进一步研制抗FasL单克隆抗体, 深入研究FasL的应用提供了材料.