人心肌营养素在大肠杆菌中的表达纯化和活性鉴定

• 作者: 廖维宏 张正丰 杨青峰
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌营养素-1 原核重组蛋白 生物活性 神经元
• 年，卷（期）: 2003,（24）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2189-2192
• 页数: 4页
• 分类号: R392.13|R378.21|R394-33
• 字数: 3456字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2003.24.009

摘要

目的利用大肠杆菌高效表达可溶性具有生物学活性的重组huCT-1蛋白.方法采用PCR及T-A克隆将huCT-1开放阅读框基因克隆到pMD-18T载体上,再构建原核表达载体pGEX2T-huCT1.在不同温度不同时间,通过IPTG诱导pGEX2T-huCT1在DH5a大肠杆菌中表达,SDS-PAGE分析表达量和可溶性蛋白比例.GST亲和柱纯化huCT-1融合蛋白,凝血酶酶切融合蛋白并纯化.坐骨神经切断模型观察重组huCT-1对脊髓前角神经元的存活作用.结果构建了huCT-1的融合表达载体pGEX2T-huCT1.通过IPTG诱导,发现29 ℃诱导4 h,目的蛋白表达量占全菌的1/5,可溶性蛋白与包涵体比为2/5.对其进行亲和柱纯化,GST/huCT-1融合蛋白纯度达到85%以上.融合蛋白酶切后,重组huCT-1蛋白纯度达到80%以上.发现原核表达重组huCT-1蛋白能挽救55%成年大鼠脊髓运动神经元的存活.结论成功地获取了具有生物活性的huCT-1的原核重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖维宏	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	100	647	14.0	20.0
2	张正丰	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	102	2107	22.0	43.0
3	杨青峰	第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室	2	20	2.0	2.0