人eNOS启动子不同序列驱动的红色荧光蛋白载体的构建与表达

• 作者: 姜勇 孙学刚 李红乐 王静珍 秦清和 赵克森 邓鹏 邢飞跃 龚小卫
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 一氧化氮合酶 启动子 红色荧光蛋白 基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 167-171
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.02.006

摘要

目的: 为了研究人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)启动子的功能,构建在哺乳动物细胞中表达的人eNOS启动子不同区段驱动的红色荧光蛋白报告基因载体. 方法: 从重组pDseNOSRed载体上将eNOS启动子的不同长度DNA序列亚克隆至红色荧光蛋白载体pDsRed1-1上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定,将重组载体pDsF1033Red, pDsF494Red和 pDsF166Red转染NIH3T3细胞,在倒置荧光显微镜下观察它们在细胞内的表达情况.结果: PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDsF1033Red, pDsF494Red和 pDsF166Red的构建正确,这些载体能在NIH3T3细胞中有效表达.由eNOS启动子不同区段驱动表达的95%以上的红色荧光蛋白均匀分布于整个细胞,转染后48-60 h开始出现,96-144 h为红色荧光蛋白(RFP)的表达高峰,RFP的荧光在144 h 最强,168 h后红色荧光逐渐消退,21 d后仍有很少量红色荧光残留.RFP的表达量和荧光强度明显低于强启动子pCMVIE驱动的RFP.结论: 成功构建了eNOS启动子不同区段驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,它们能在哺乳动物细胞中有效表达,静息状态下呈现弱转录活性,为研究人eNOS启动子不同区及其顺式调控元件的作用提供了实用而又方便的工具.