葡萄球菌肠毒素B基因真核表达系统的构建及目的蛋白的鉴定

• 作者: 严杰 孙爱华 毛亚飞
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素B SEB基因 真核表达系统
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 341-343,379
• 页数: 4页
• 分类号: Q352
• 字数: 2732字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2004.06.002

摘要

目的克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其真核表达系统并表达目的蛋白.方法采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB,目的片段T-A克隆后测序.重组质粒pUCm-T-SEB经酶切获得的pUCm-T-SEB基因片段与真核表达载体pPIC9K连接.将重组真核载体pPIC9K-SEB转化入P.pastoris GS115株,经PCR筛选并鉴定pPIC9K-SEB-P.pastoris GS115.在0.5%(v/v)甲醇诱导下,采用SDS-PAGE检测重组SEB(rSEB)的表达,并对rSEB的N端氨基酸序列和诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1α和TNFα的作用进行了检测.结果所克隆的SEB基因核苷酸及氨基酸序列的同源性分别高达98.84%～100%和100%.表达的SEB在SDS-PAGE图谱的位置与预期相符.rSEB氨基末端氨基酸序列与预期完全相符.rSEB与SEB商品有相似的促人脐静脉内皮细胞EVC-304分泌IL-1α和TNFα的活性.结论已成功地构建了SEB的真核表达系统,为进一步分析SEB分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙爱华	浙江医学高等专科学校医学检验系	112	523	11.0	15.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
3	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0