志贺毒素B(ShT-B)在E.coli中的融合表达及特异性抗体制备

• 作者: 吴东林 喻华英 康琳 王景林 赵金红 高丰
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 痢疾志贺茵 志贺毒素B 融合表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 58-62
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 3237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2004.01.012

摘要

用Kpn I、Hind Ⅲ酶切克隆载体pGEM-ShTB3,然后亚克隆入带有二氢叶酸还原酶(DHFR)的融合表达载体pQE40,构建重组质粒pQE40-ShTB.转化到E.coli M15中,经IPTG诱导,实现了ShTB-DHFR融合蛋白的高表达,表达量约占菌体总蛋白的21.9%,为包涵体形式.在变性条件下,包涵体蛋白经螯合镍离子的次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和柱一步纯化,得到了纯度为90.5%的重组ShT-B.以纯化的ShTB-DHFR融合蛋白免疫昆明鼠,并结合腹腔注射S180细胞,成功制备了抗ShTB腹水多克隆抗体,效价达1:1×106.间接ELISA和Western印迹结果表明,抗ShT-B多抗与重组蛋白和天然ShT均有特异性结合.本试验结果为毒素检测方法的研究奠定了基础.