纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立

• 作者: 于保锋 张悦红 牛勃 王惠珍 程牛亮 胥显民 解军 郝一彬 陈显久
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 纤溶酶原 hPK-5 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 207-210
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 字数: 2822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2004.04.005

摘要

目的建立纤溶酶原饼环区5(Human plasminogen kringle 5,hPK-5)蛋白重组大肠杆菌高效表达体系,为高密度发酵创造条件.方法观察一级、二级种子的生长状态,比较表达hPK-5蛋白的4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况,选出首选发酵种子;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化;并用凝胶成像分析系统对SDS-PAGE结果进行分析.结果经过筛选,JM109/pBV220/hPK-5(简称JP5)是获取hPK-5蛋白的首选工程菌株,其最佳表达条件是LB培养基(pH7.4、溶解氧充足)、30℃培养3h、42℃诱导6 h.在此条件下,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的38%左右.结论为高密度发酵获取hPK-5蛋白奠定了实验基础.