简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

• 作者: 孙剑 王健琪 翟朝阳
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 简化的hPK-5 Kirngle环 基因重组 融和表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 页码范围: 435-440
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4361字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0490-6756.2006.02.038

摘要

从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	翟朝阳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学实验室	19	188	7.0	13.0
2	王健琪	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学实验室	4	8	1.0	2.0
3	孙剑	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学实验室	2	7	1.0	2.0