黑曲霉N14植酸酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达

• 作者: 刘生峰 周泽扬 彭远义 李春明
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑曲霉N14 植酸酶 phyA基因 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 生物制药
• 页码范围: 967-971
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 5080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.06.030

摘要

从黑曲霉N14基因组DNA中扩增出植酸酶phyA基因表达片段,并将其克隆到pMD18-T载体中.以此片段构建了pPIC9K-phyA重组表达载体,目的片段以正确的阅读框架插入到pPIC9K的多克隆位点EcoRⅠ和Not Ⅰ之间.重组表达载体经Xba Ⅰ线性化处理,电击转化毕赤酵母,经G418抗性筛选、酶活性测定、PCR鉴定和SDS-PAGE分析,获得了两株产酶活性分别为143 958.3u/mL发酵液(PP-N14-22)和148 908.3u/mL发酵液(PP-N14-44)的高产工程菌,其酶活性分别是出发菌株酶活性(422u/mL)的341.13倍和352.86倍,重组酵母具有很好的遗传稳定性.重组植酸酶在pH值2.5～3.0和5.0～5.5时酶活性最高,且在pH4.5～6.5之间均有相当高的酶活性,最适作用温度为55℃.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭远义	西南农业大学重庆市蚕桑学重点实验室微生物中心	16	221	7.0	14.0
5	李春明	西南农业大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室	4	55	3.0	4.0
6	刘生峰	西南农业大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室	3	36	3.0	3.0
7	周泽扬	西南农业大学重庆市蚕桑学重点实验室微生物中心	50	933	19.0	28.0