铜绿假单胞菌外毒素A表达载体的构建及可溶性表达

• 作者: 胡晓梅 胡福泉 金晓琳 饶贤才 黄建军
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 外毒素A 重组质粒 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 156-158
• 页数: 3页
• 分类号: R37
• 字数: 2736字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.02.023

摘要

目的实现铜绿假单胞菌外毒素A(PEA)全基因的可溶性表达.方法用基因重组技术构建pMAL-PEA原核分泌型表达载体,并在大肠杆菌BL21中进行表达,然后利用直链淀粉树脂对表达蛋白进行亲和层析纯化.结果酶切鉴定及测序结果表明pMAL-P2X载体上成功地插入了PEA全基因.用IPTG诱导目的基因表达,表达的融合蛋白量约占细菌总蛋白的20%.表达产物经超声处理后,80%的融合蛋白存在于上清液中,说明实现了PEA的可溶性表达.表达的融合蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳,显示为一条蛋白带,分子量约为112kD.结论成功地对PEA全基因进行了可溶性表达和纯化,获得了稳定表达的工程菌,为深入研究PEA的致病机制和制备用于免疫导向治疗的重组毒素奠定了基础.