bar因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的分离和纯化

• 作者: 罗云波 许文涛 黄昆仑
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: bar基因 膦丝菌素乙酰转移酶 高效表达 分离纯化
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 583-588
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 5760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2004.05.020

摘要

bar基因来源于P3301质粒载体,通过构建PB813测序载体对bar基因进行了测序,与GenBank中bar基因全编码区比较发现:在DNA上有两个碱基不同,但在蛋白质水平上完全相同.用PCR方法从P3301载体上克隆了552碱基的bar基因全长序列插入到大肠杆菌(Escherichia coii)表达载体pET30a(+)中,构建了pET30a-bar融合表达载体并转入大肠杆菌宿主菌BL21(DE3).在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET30a-bar融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以可溶性蛋白的形式高效表达了膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),并通过金属鏊和层析一步纯化了目的蛋白.用肠激酶切除了融合蛋白的融合部分之后再一次通过金属鏊和层析,经过透析后获得了PAT纯品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗云波	中国农业大学食品科学与营养工程学院	257	3241	29.0	44.0
2	黄昆仑	中国农业大学食品科学与营养工程学院	85	903	16.0	26.0
3	许文涛	中国农业大学食品科学与营养工程学院	109	782	15.0	23.0