抗Pgp基因工程抗体ScFv的构建、表达及其活性测定

• 作者: 彭晖 杨纯正 熊冬生 范冬梅 许元富 邵晓枫 高瀛岱
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单克隆抗体 ScFv P糖蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 267-271
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3722字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建表达抗PgpScFv,进行体外活性的测定.方法:利用RT-PCR方法,克隆抗Pgp杂交瘤细胞PHMAO2的重链可变区基因(VH),轻链可变区基因(VL),拼接为单链抗体(ScFv),再克隆到具有强启动子的PET28a(+)载体上进行表达,并进行了表达产物体外活性的测定.结果:构建了表达质粒PET28a(+)-ScFvPGP.表达产物可与表达Pgp抗原的K562/A02细胞特异性结合,并不抑制Pgp外排泵的功能.结论:构建表达的抗PgpScFv只有针对Pgp抗原的识别功能,并无抑制作用,因此应用于人体后不会干扰正常细胞的排泄分泌功能,无论是作为靶向诊断治疗的载体还是作为双功能抗体的一臂,均具有广泛的应用前景.