表达人泛素样修饰子基因细胞株的构建及其鉴定

• 作者: 周作民 朱虎 李建民 沙家豪 胡艳秋 袁娲 鲁可可
• 来源期刊: 南京医科大学学报(自然科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 人泛素样修饰子(hUBL) 基因克隆 蛋白表达 逆转录病毒载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 332-334,350
• 页数: 5页
• 分类号: R373|Q786
• 字数: 2868字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2004.04.005

摘要

目的:构建人泛素样修饰子(hUBL)基因的逆转录病毒载体并转染293T细胞,以探讨其生物学功能.方法:将hUBL克隆到原核表达质粒PET28a中,构建重组质粒PET28a-hUBL,转化BL21菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.用其纯化蛋白免疫小鼠,获得多克隆抗体.重组蛋白用Western blot鉴定.将hUBL基因克隆到逆转录病毒质粒中并转染293T细胞,用免疫组化染色法鉴定hUBL基因的表达.结果:hUBL在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了hUBL-PET28a的融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗hUBL蛋白的小鼠多克隆抗体.免疫组化染色表明,hUBL重组逆转录质粒可在293T细胞中高效表达hUBL蛋白.结论:成功地构建了hUBL重组逆转录病毒载体,使得其在293T细胞中表达,获得稳定表达的细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡艳秋	南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室	10	12	2.0	2.0
2	沙家豪	南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室	43	199	8.0	12.0
3	周作民	南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室	51	253	9.0	14.0
4	鲁可可	南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	朱虎	南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室	5	14	2.0	3.0
6	袁娲	南京医科大学江苏省生殖医学重点实验室	1	1	1.0	1.0