Canstatin基因表达载体的构建及其生物学效应研究

• 作者: 余时沧 戢福云 李淑平 李玉英 王兴友 钱桂生 陈维中 黄桂君
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人血管能抑制素 血管生成 肿瘤治疗
• 年，卷（期）: 2004,（19）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1723-1725
• 页数: 3页
• 分类号: Q782|R394-33|R979.1
• 字数: 3315字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2004.19.008

摘要

目的构建可表达人血管生成抑制素(canstatin)蛋白的真核表达载体,探索canstatin对人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)和人肺腺癌A549细胞株的生物学效应.方法 RT-PCR法从胎儿肝组织中获取canstatin cDNA全长,并将其克隆到真核蛋白表达载体pCMV-Script上.阳离子脂质体介导该重组载体转染HUVE细胞系、A549细胞株.RT-PCR法检测其对canstatin mRNA的表达.台盼蓝拒染法活细胞记数,3H-TdR掺入法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期.结果成功构建pCMV-Script-Cans真核表达重组载体,并在转染该表达载体的A549及HUV-EC-C细胞株中均检测到canstatin mRNA的表达.HUV-EC-C细胞株pCMV-Script-Cans载体转染组比空载体组3H-TdR掺入量明显减低(P＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),A549细胞株转染组与空载体组3H-TdR掺入量无显著差异(P＞0.05),细胞凋亡率无显著差别(P＞0.05).结论 pCMV-Script-Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达canstatin,并抑制内皮细胞增殖,诱导内皮细胞凋亡,但对肿瘤细胞没有直接抑制作用.