人resistin基因原核表达载体构建和表达

• 作者: 何东华 何祥梁 傅祖植 杨川 程桦 黎锋
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 2型糖尿病 胰岛素抵抗 resistin 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 413-416
• 页数: 4页
• 分类号: R587.1
• 字数: 2519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2004.05.007

摘要

[目的]构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础.[方法]酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒.重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1 mmol/LIPTG在32℃诱导表达2 h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达.[结果]RT-PCR扩增产物分子大小为327 bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区.PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段.重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327 bp、4 980 bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5 kD的融合蛋白.[结论]成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅祖植	中山大学附属第二医院内分泌科	74	516	14.0	20.0
2	黎锋	中山大学附属第二医院内分泌科	76	473	12.0	18.0
3	程桦	中山大学附属第二医院内分泌科	113	817	15.0	23.0
4	杨川	中山大学附属第二医院内分泌科	76	431	11.0	19.0
5	何祥梁	中山大学附属第一医院急诊科	5	10	2.0	2.0
6	何东华		2	4	2.0	2.0