发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

• 作者: 刘晓宏 王明海 王锋超 程天民 粟永萍 陆建华 麦跃
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: NF-κB RNA干扰 ECV-304 LPS
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 655-657
• 页数: 3页
• 分类号: Q522|R782|R392.1
• 字数: 3129字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2004.08.001

摘要

目的采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,通过构建人NF-κB p65基因的特异性siRNA真核表达载体,体外观察对NF-κB基因的沉默作用,以及对内毒素(LPS)刺激后NF-κB活性的调控作用.方法采用基因克隆技术,将合成的发卡样特异性p65 RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体(pPUR/U6),构建p65 siRNA的表达载体,转染体外ECV-304细胞,48h后观测胞内NF-κB p65亚单位蛋白水平(Western blotting)、及对LPS(10 μg/ml)刺激后NF-gB活化的抑制作用.结果①成功构建发卡样p65 siRNA(small interfere RNA)真核表达载体(pPUR/U6-p65 siRNA);②pPURyU6-p65 siRNA转染(脂质体法)ECV-304细胞,48 h后明显下调胞内P65蛋白水平;③转染pPUR/U6-p65 siRNA的细胞,明显抑制LPS(10μg/ml)刺激后NF-κB的活化.结论该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放,进而抑制NF-κB的活化,可望进一步抑制细胞的过度炎症反应,减轻创伤组织的受损程度,促进创伤后组织的修复.