SP-A1在甲醇酵母中的分泌表达及产物的鉴定

• 作者: 任大明 兰和魁 封志纯 杜江 王霞 赵倩
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 表面活性物质相关蛋白A1 甲醇酵母 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 391-394
• 页数: 4页
• 分类号: Q591.2
• 字数: 3073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8199.2004.05.003

摘要

目的:研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP-A1)在甲醇酵母Pichia pastoris(P.pastoris)中的分泌表达、产物的分离纯化及免疫活性测定. 方法:将人SP-A1基因克隆至P.pastoris的分泌表达质粒pPIC9K上,获得重组表达质粒pPIC9K/SP-A,转化P.pastoris GS115、KM71.通过G418筛选获得高拷贝转化子(HIS4Mut+),在摇瓶中培养、甲醇诱导表达SP-A1,纯化目的蛋白,并免疫小鼠,ELISA 法和 western blotting分析SP-A1的免疫活性. 结果:SDS-PAGE结果显示,在P.pastoris 中经甲醇诱导,SP-A1获得表达,其表达量在上清中为200 mg/L.经过纯化可获得纯度达95%以上的蛋白质.ELISA法和western blotting结果表明,目的蛋白可被多克隆抗体识别,可刺激小鼠产生抗体. 结论:人组织特异性蛋白SP-A1可在P.pastoris中表达,表达产物具有免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	封志纯	第一军医大学珠江医院儿科	89	474	11.0	17.0
2	任大明	复旦大学遗传所	98	819	15.0	24.0
3	杜江	第一军医大学珠江医院儿科	25	164	7.0	12.0
4	王霞	第一军医大学珠江医院儿科	6	19	2.0	4.0
5	兰和魁	第一军医大学珠江医院儿科	9	44	4.0	6.0
6	赵倩	第一军医大学珠江医院儿科	4	4	1.0	2.0