结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在pET原核表达系统中的表达与纯化

• 作者: 吴少庭 张仁利 林绮萍 温见翔 潘晖榕 秦莉 袁仕善 陈群 雷明军 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 ESAT-6 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 897-899,925
• 页数: 4页
• 分类号: R378.911
• 字数: 2841字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9727.2004.06.001

摘要

目的构建能在pET原核表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化.方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序;用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pET-23a(+),构建pET-ESAT-6重组质粒,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3);PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;用His·BindTM柱亲和层析法纯化融合蛋白.结果从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出ESAT-6基因片段,成功构建重组表达质粒pET-ESAT-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别.结论利用pET原核表达系统成功表达和纯化了结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础.