酵母双杂交筛选白细胞中新基因NS3TP6结合蛋白基因

• 作者: 刘敏 卢成哲 张健 成军 李强 梁耀东 王琳 白雪帆 邵清
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 生物学
• 年，卷（期）: 2004,（7）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 1717-1720
• 页数: 4页
• 分类号: Q7
• 字数: 5724字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.07.050

摘要

目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)反式调节靶基因编码产物NS3TP6蛋白结合蛋白的基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV NS3TP6蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AHl09并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出HCV NS3TP6蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共7个,其中3个人类白细胞CDl4抗原,1个人类免疫球蛋白入轻链,3个人类推定蛋白基因(ACl24014,AC097504,AC023785).结论:成功克隆出NS3TP6蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.