人EGF受体L2结构域在大肠杆菌中表达、包涵体柱上复性及纯化

• 作者: 何贤辉 徐丽慧 洪岸
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 表皮生长因子受体 L2结构域 原核表达 包涵体 重折叠
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 597-603
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 6379字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.017

摘要

以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码EGFR-L2结构域的DNA片段,在其3'端加入编码His6标签的序列,与pET-3c连接构建EGFR-L2原核表达载体.该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,免疫印迹分析表明表达产物全部以包涵体形式存在,分步透析法和稀释法都不能获得可溶性复性产物,而Ni2+-NTA柱上复性法不仅能够获得可溶性的EGFR-L2蛋白,而且产物同时得到高度纯化,纯度＞95%,复性的EGFR-L2与其配基EGF具有特异性的结合活性,但亲和力较低.这表明His6标签不但便于纯化目标蛋白,而且可利用Ni2+-NTA柱进行柱上复性,适用于不易通过常规方法复性的重组蛋白的制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐丽慧	暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室	69	509	13.0	20.0
9	何贤辉	暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室	98	770	16.0	23.0
10	洪岸	暨南大学生物工程研究所	107	856	14.0	25.0