大肠杆菌中表达CrylC基因及其重组表达产物的纯化及复性

• 作者: 元延芳 冉文君 曹思硕 梁立兴 罗云波 许文涛 贺晓云 黄昆仑
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: CrylC蛋白 稀有密码子 包涵体 表达 纯化 复性折叠
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 211-215
• 分类号: Q344.13
• 字数: 4166字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR方法将苏云金芽孢杆菌CrylC基因从原始质粒中克隆出来.由于CrylC基因携带了大量大肠杆菌稀有密码子,因此用PCR方法对其前86个密码子进行修改,以提高其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达量.CrylC蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式大量表达,将包涵体用8mol/L尿素溶解并用His Trap(TM)FF凝胶柱纯化.所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性折叠,最终得到可溶并有生物活性(由三化螟活性实验验证)的蛋白.CrylC蛋白纯度可达99.2%.