含XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1重组菌B-pGp1表达条件的研究

• 来源期刊: 皮革科学与工程
• 学科: 生物学
• 关键词: 地衣芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 克隆 表达 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 27-30,35
• 页数: 5页
• 分类号: Q814
• 字数: 3190字
• 语种: 中文

摘要

用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增得到了高温中性蛋白酶基因Gp1,将扩增的DNA片段与表达载体pET-28a连接构建成重组分泌型表达载体pGp1.转化大肠杆菌BL21,得到重组大肠杆菌B-pGp1.酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性.SDs-PAGE电泳结果显示具有明显的特异性表达条带,单体融合表达产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符.实验证明,重组质粒在宿主BL21中有很好的稳定性,在有选择压力条件下传代60次基本稳定,传代80次重组质粒保留68%以上.摇瓶实验确定了重组菌的最佳表达条件为IPTG0.75 mmol/L,培养起始pH=6,培养温度为37℃.重组菌所得酶活为2184μ/mL,是受体菌株酶活的11倍.