蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定

• 作者: 刘琼 詹金彪 陈欣虹
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 蓖麻蛋白 蓖麻毒素A链 发光蛋白质类 重组融合蛋白质类/生物合成 基因表达 大肠杆菌/代谢 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 201-206
• 页数: 6页
• 分类号: R996.2
• 字数: 3516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.03.002

摘要

目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白 (GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究.方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性.结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性.结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘琼	浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室	15	95	6.0	9.0
3	詹金彪	浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室	45	200	8.0	12.0
4	陈欣虹	浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室	1	5	1.0	1.0