Wilson病ATP7B基因重组腺病毒载体Ad-ATP7B的构建

• 作者: 刘然义 梁秀龄 汤其强 黄必军 黄文林
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝豆状核变性 腺病毒载体 基因疗法
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 541-544
• 页数: 4页
• 分类号: R742.4
• 字数: 3622字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2005.06.001

摘要

目的构建Wilson病基因ATP7B的重组腺病毒载体.方法分别以BamH Ⅰ+SalⅠ双酶切pcDNA3.0/ATP7B和pDC315,将ATP7B cDNA目的基因片段和线性化的pDC315连接,定向克隆构建pDC315/ATP7B,以PCR和酶切的方法鉴定.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞构建Ad-ATP7B,PCR进行鉴定. 结果经PCR和酶切鉴定证实pDC315/ATP7B构建成功.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad-ATP7B构建已完成.结论本实验成功构建了ATP7B外源目的基因序列完全正确的重组腺病毒载体Ad-ATP7B,为下一步采用ATP7B基因重组腺病毒载体对Wilson病进行基因治疗打下了基础.