人LXR-LBD原核表达载体的构建及其在E.coli中的表达

• 作者: 叶治家 巩艳 彭家和 曹廷兵 江渝
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: LXR LXR-LBD 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 页码范围: 33-37
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4153字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2005.01.008

摘要

从正常中国人的肝脏组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的LXR-LBD cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-LXR-LBD,序列分析表明正常中国人的LXR-LBD cDNA序列与Gene Bank报道的序列一致.把构建的pET28a-LXR-LBD质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达,Western blot检测表达产物,在相对分子质量35 kD处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在.在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90%以上.