问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性

• 作者: 严杰 李淑萍 李立伟 毛亚飞 罗依惠 钊守凤 阮萍
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体,问号 lipL32/1基因 ompL1/1基因 序列同源性,核酸 序列同源性,氨基酸 真核表达 克隆,分子 lipL32/1-ompL1/1融合基因/免疫学
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 33-37,42
• 页数: 6页
• 分类号: R377|Q784
• 字数: 3649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.007

摘要

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)的融合基因lipL32/1-ompL1/1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性.方法:采用连接引物PCR构建融合基因lipL32/1-ompL1/1,克隆测序后构建lipL32/1-ompL1/1的毕赤酵母真核表达系统pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.用MM和MD平板分离His+ Mut+型菌落,YPD平板筛选出G418高抗性的His+ Mut+ 转化子.以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子His+ Mut+克隆裂解产物为模板,5'AOX1和3'AOX1为引物,用PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体DNA中的目的融合基因.在BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白rLipL32/1-rOmpL1/1表达.采用硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析提纯培养物上清液中的rLipL32/1-rOmpL1/1.采用SDS-PAGE和Western blot分别检测rLipL32/1-rOmpL1/1的产量及其免疫反应性.结果:获得的lipL32/1-ompL1/1融合基因约为1 794 bp.其核苷酸和氨基酸序列与原始lipL32/1和ompL1/1基因型比较,相似性分别高达99.94%和100%.所构建的真核表达系统可分泌rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE后位于预期位置处,产量约占上清总蛋白的40%.rLipL32/1和rOmpL1/1兔抗血清均能与表达的rLipL32/1-rOmpL1/1结合.结论:本研究成功地构建了钩体lipL32/1-ompL1/1融合基因高效毕赤酵母真核表达系统,所表达的融合蛋白具有特异的免疫反应性,可作为研制钩体新疫苗的候选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮萍	绍兴文理学院医学院	24	101	6.0	9.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
3	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
4	李立伟	浙江大学医学院病原生物学教研室	34	277	7.0	15.0
5	李淑萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	16	109	6.0	10.0
6	罗依惠	浙江大学医学院病原生物学教研室	14	68	6.0	7.0
7	钊守凤	浙江大学医学院病原生物学教研室	7	42	3.0	6.0