稳定表达HCV 1a NS5A和NS5A-△ISDR细胞株的构建

• 作者: 吕欣 尹文 廖继佩 徐志凯 杨敬 薛小平 雷迎峰
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 干扰素敏感决定区 HeLa细胞系 增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|R373.2+1
• 字数: 2743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2005.01.001

摘要

以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经Xho Ⅰ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoR Ⅰ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR.对重组质粒进行酶切分析和序列测定.将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定.经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR.RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达.以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCV NS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐志凯	第四军医大学微生物学教研室	216	1097	15.0	22.0
2	尹文	第四军医大学微生物学教研室	264	1718	18.0	25.0
3	吕欣	第四军医大学微生物学教研室	48	174	7.0	10.0
4	雷迎峰	第四军医大学微生物学教研室	60	194	7.0	10.0
5	杨敬	第四军医大学微生物学教研室	35	91	5.0	7.0
6	薛小平	第四军医大学微生物学教研室	27	202	8.0	13.0
7	廖继佩	第四军医大学微生物学教研室	3	15	2.0	3.0