pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒构建及其转染Bcap-37细胞后细胞凋亡的研究

• 作者: 吴金民 方永明 王晓稼 耿礼义 蒋文智 郁琳琳 郑树
• 来源期刊: 实用癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Hsp70蛋白 反义核酸 基因重组 转染 乳腺癌 凋亡
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 225-228
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3481字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5930.2005.03.001

摘要

目的构建人反义Hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As]并观察其对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡特性的影响.方法依照人hsp70mRNA全长序列,通过计算机分析,设计一对引物,在上游引物中带有1个BamHⅠ位点,经RT-PCR扩增、电泳、回收和纯化hsp70144-517片段,通过T-A克隆到pGEM-TEasy原核表达质粒中,经DNA测序和EcoRⅠ酶切图谱鉴定;EcoRⅠ酶切产物回收后亚克隆到pcDNA3.1(+)质粒中EcoRⅠ位点之间,利用BamH Ⅰ酶切图谱筛选反向插入重组质粒,经DNA测序得到pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As重组质粒.以脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As转染到乳腺癌Bcap-37细胞中并克隆培养建株得到AsHsp-Bcap细胞.以DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞周期分析观察转染细胞的凋亡特性.结果本研究成功构建人反义hsp70重组质粒[pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As];转染到乳腺癌Bcap-37细胞后在DNA琼脂糖凝胶电泳上观察到细胞凋亡特征性DNA Ladder及流式细胞周期分析发现G1峰前有1个特征性Ap峰(亚二倍体峰).结论构建人反义重组质粒pcDNA3.1(+)-Hsp70144-517As对乳腺癌Bcap-37细胞有促进细胞凋亡的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑树	浙江大学肿瘤研究所	227	2645	27.0	42.0
2	吴金民	浙江大学肿瘤研究所	48	282	11.0	13.0
3	方永明	浙江大学肿瘤研究所	14	98	6.0	9.0
4	蒋文智	浙江大学肿瘤研究所	9	29	3.0	5.0
5	耿礼义	浙江大学肿瘤研究所	7	49	5.0	7.0
6	王晓稼	浙江肿瘤医院化疗中心	2	4	1.0	2.0
7	郁琳琳	浙江大学肿瘤研究所	3	3	1.0	1.0