富含二硫键的膜蛋白p185胞外区在大肠杆菌中的可溶性表达和性质鉴定

• 作者: 刘兢 刘海波 李良维 梁顿 程联胜 胡思怡
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 医学
• 关键词: p185胞外区 融合蛋白 谷胱甘肽S转移酶
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 590-596
• 页数: 7页
• 分类号: R392.11
• 字数: 6146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.04.016

摘要

Her2/c-erbB-2基因(其产物为膜蛋白p185)是表皮生长因子受体(EGFR)基因家族的一员,在约30%的乳腺癌中发现了其过量表达.为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用,采用PCR的方法从含Her2/c-erbB-2基因的pBabe/erbB-2质粒中扩增了p185胞外区的富含二硫键的第一、二结构域和第四个结构域.产物克隆到pGEX/4T-1载体后,转化大肠杆菌Origami B(DE3)pLysS菌株,用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎,SDS-PAGE检测表达上清,得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白.经ELISA、Western blot等方法鉴定,可溶性表达产物具有完全的抗体结合活性,且当用凝血酶把GST切掉后该活性仍然保留.p185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考;并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定,以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程联胜	中国科学技术大学生命科学学院细胞免疫学实验室	17	74	6.0	7.0
2	刘兢	中国科学技术大学生命科学学院细胞免疫学实验室	42	238	8.0	13.0
3	刘海波	中国科学技术大学生命科学学院细胞免疫学实验室	84	955	15.0	29.0
4	李良维	中国科学技术大学生命科学学院细胞免疫学实验室	2	13	2.0	2.0
5	胡思怡	中国科学技术大学生命科学学院细胞免疫学实验室	2	11	1.0	2.0
6	梁顿	中国科学技术大学生命科学学院细胞免疫学实验室	1	11	1.0	1.0