实时荧光定量PCR技术在检测外源基因拷贝数中的应用

• 作者: 于新智 奚亚军 布都会 朱建楚 王新中 胡银岗
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 外源基因 拷贝数
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 页码范围: 78-82
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 5628字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1389.2005.06.018

摘要

通过对PCR法、Southern Blot法、IPCR法与实时荧光定量法4种转基因外源基因检测方法的比较认为:PCR扩增虽十分灵敏,但有时会出现假阳性扩增,因而对外源基因是否整合还需进行验证.Southren方法准确性高,特异性强,但存在费时、费力的缺点.同时实际操作中就需要较大量的植物材料来提取DNA,而转基因植物的愈伤组织在无菌条件下经过筛选、重新分化后,一般都比较细弱,不宜大量取样.IPCR法虽可以转座突变分离基因,但当转座子作为外源基因通过农杆菌介导等方法导入植物时,由于T DNA整合到染色体中引起插入突变并分离基因造成误差.实时定量PCR技术的特异性和高信噪比为转基因拷贝数定量提供了方便,实时定量PCR法,花费试剂少、节省劳力和时间,需要DNA样品量少、并不进行放射检测.同时对实时荧光定量PCR法计算进行了详细介绍.