诺卡氏菌腈水合酶基因在重组毕赤酵母中的表达

• 作者: 于慧敏 史悦 沈忠耀 温斐 田卓玲
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 诺卡氏菌 腈水合酶 外源表达 大肠杆菌 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 959-962
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 4038字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.06.029

摘要

为从基因水平上改造腈水合酶,进行了诺卡氏菌腈水合酶基因的外源表达研究.在重组大肠杆菌表达系统内,腈水合酶的α亚基几乎不能正常表达,在重组E. coli BL21(DE3) (pET32a-NHBAX)中,腈水合酶活性仅为0.04U/mg.构建重组毕赤酵母表达质粒pPIC3.5k-NHBAX,采用电穿孔转化法将其转入宿主菌P. pastoris GS115中,经过菌株培养和腈水合酶的诱导表达,筛选获得了优选菌株P. pastoris NH4.对P. pastoris NH4的细胞培养和腈水合酶的诱导表达条件进行优化,结果表明,重组腈水合酶在毕赤酵母中的表达水平可以达到0.52U/mg,但不能稳定积累.