脂质体介导增强型绿色荧光蛋白和胶质细胞生长因子双基因载体在脊髓内共转染表达

• 作者: 李家顺 王长峰 董艳 薛亚军 贾连顺 韩晞 魏梅洋
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 胶质细胞生长因子2 增强型绿色荧光蛋白 脂质体 转染 脊髓
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 937-939
• 页数: 3页
• 分类号: R744
• 字数: 3212字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.2005.08.033

摘要

目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)和胶质细胞生长因子2(glial growth factor 2, GGF2)的双基因真核表达载体pIRES2-EGFP-GGF2, 研究GGF2在大鼠脊髓内的表达.方法:采用RT-PCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出GGF2全序列cDNA,利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖进入位点(internal ribosome entry site, IRES),构建GGF2与EGFP双基因真核表达载体pIRES2-EGFP-GGF2.采用基因注射法将阳离子脂质体Transfectam和pIRES2-EGFP-GGF2基因混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中,观察GGF2在大鼠脊髓中的表达.结果:成功构建pIRES2-EGFP-GGF2质粒,在转染的局部脊髓内观察到GGF2 mRNA表达显著增加.荧光显微镜下观察发现,注射局部灰质和白质神经元内均有较多绿色荧光蛋白表达.结论:阳离子脂质体能介导EGFP和GGF2双基因载体在脊髓内同时表达,EGFP可作为报告基因观察GGF2在脊髓内的表达.