起搏通道HCN2基因和增强型绿色荧光蛋白双基因载体在人胚胎肾细胞的共转染表达

• 作者: 刘丹妮 刘兴亚 刘铁牧 姚成立 李泱
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 离子通道 发光蛋白质类 转染
• 年，卷（期）: 2008,（42）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8323-8326
• 页数: 4页
• 分类号: R329.251
• 字数: 4442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.42.034

摘要

背景:获得高效、安全的基因转移载体是目前研究的目标.目的:构建携带起搏通道(HCN2)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双基因真核表达载体,并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)表达情况.设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2006-0712007-08在全军重点实验室解放军总医院老年心血管病研究所完成.材料:质粒pIRES-EGFP为Clontech公司产品,PCI-HCN2质粒,含有人全长HCN2基因为解放军总医院老年心血管病研究所惠赠.方法:利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖进入位点(IRES),构建HCN2与增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pIRES-EGFP-HCN2.将脂质体和plRES-EGFP-HCN2基因混合后转染人胚胎肾细胞,用反转录-聚合酶链反应检测HCN2 mRNA表达.主要观察指标:①重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2的构建.②起捧通道基因HCN2cDNA的克隆.③增强型绿色荧光蛋白表达的荧光检测.结果:构建的pIRES-EGFP-HCN2在转染8 h后开始表达,48 h达到最高.经酶切鉴定含有增强型绿色荧光蛋白和HCN2基因.结论:实验成功地构建了pIRES-EGFP-HCN2真核共表达载体,具有HCN2、增强型绿色荧光蛋白的双重活性,IRES能够介导外源基因HCN2在人胚胎肾细胞表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚成立		44	139	6.0	9.0
2	李泱	解放军总医院老年心血管病研究所	85	252	8.0	12.0
3	刘丹妮		7	14	1.0	3.0
4	刘铁牧		1	1	1.0	1.0
5	刘兴亚		1	1	1.0	1.0