人内皮抑素endostatin基因的融合表达纯化及活性测定

• 作者: 何援利 刘芸 杨芳
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人内皮抑素基因 融合表达 活性 逆转录-聚合酶链反应 MTT法
• 年，卷（期）: 2005,（13）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1554-1557
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3287字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2005.13.015

摘要

目的:获得有活性的人内皮抑素(endostatin)融合蛋白.方法:从人胎肝组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出endostatin基因,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,纯化,MTT法测定endostatin蛋白对人脐带静脉血管内皮细胞的抑制活性.结果:RT-PCR获得endostatin基因,扩增产物在10g/L琼脂糖凝胶上显示为1条扩增条带,约573 bp,与预计大小一致.将PCR产物连入PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆经KpnI,NotI酶切鉴定、测序验证.构建pTRX-endo表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达,经SDS-PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,大小与预期相符合.重组蛋白经纯化,MTT法测定重组人内皮抑素蛋白具有生物学活性.人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)受到明显抑制,具有剂量依赖抑制关系,ED50=550μg/L.结论:人内皮抑素基因在原核细胞表达载体pTRX中获得成功表达,表达蛋白能够抑制人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)的增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨芳	南方医科大学珠江医院妇产科	53	220	7.0	12.0
2	何援利	南方医科大学珠江医院妇产科	173	1264	19.0	26.0
3	刘芸	中山大学生命科学院医药分子生物学实验室	5	16	2.0	4.0