凋亡素基因的原核表达构建与提纯

• 作者: 杨俊文
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 凋亡素基因 表达系统构建 蛋白提纯
• 年，卷（期）: 2005,（22）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3420-3423
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2005.22.017

摘要

目的构建凋亡素原核表达系统,制备提纯抗原物质凋亡素融合蛋白.方法用PCR的技术,以pcDNA-VP3质粒为模板,扩增出凋亡素VP3基因.将其克隆到原核表达载体pET-DsbA的多克隆位点,构建成凋亡素的高效原核表达载体pET-DsbA-VP3,将该质粒转化到大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plysS中,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)对其进行诱导表达,固化Ni离子金属鏊合纯化带6X组氨酸标签的凋亡素融合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白.结果转化有凋亡素基因的原核表达载体pET-DsbA-VP3的大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plysS经IPTG诱导,固化Ni离子金属鏊合亲和层析纯化凋亡素融合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳获得分子量为38.3 KD的目的蛋白条带.结论凋亡素原核表达载体pET-DsbA-VP3能高效表达出凋亡素融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨俊文	浙江省温州医学院附一医院内镜诊疗中心	1	0	0.0	0.0