鹅细小病毒vp1基因片段的原核表达及抗血清的制备

• 作者: 冉多良 刘胜旺 孔宪刚 王懂帅 王静 邵昱昊 韩宗玺
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅细小病毒 vp1基因片段 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 788-792
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3741字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.05.029

摘要

利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Goos eparvovirus,GPV)HG5/82株vp1基因5'端长662 bp的基因片段,将其克隆到pMD18-T Simple载体后,转化入大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α细胞.筛选阳性质粒,并通过BamH Ⅰ和Hind Ⅲ将外源基因定向克隆到原核表达载体pPROEXTMHTb,所得的阳性重组质粒经序列测定,证明外源片段正确插入到pPROEXTMHTb的预期位置.将转入外源基因的工程菌经0.6mmol/LIPTG诱导,SDS-PAGE电泳表明,外源基因表达,融合蛋白分子量约为32 kD.通过薄层扫描分析显示,融合蛋白表达量占工程菌菌体总蛋白的22.8%.经诱导后的工程菌用6 m0l/L盐酸胍裂解,再经超声处理后离心,用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化.纯化所得的融合蛋白免疫白兔,制备了兔抗鹅细小病毒结构蛋白的抗血清.Western blot结果表明,抗血清与表达的融合蛋白及亲本病毒的VP1和VP2都具有反应性.