猪IGF-Ⅰ mRNA实时荧光定量PCR定量标准的构建

• 作者: 刘保国 张嘉保 张树敏 戴立胜 李毅 李爽 肖书奇 赵中利 赵志辉 高妍
• 来源期刊: 广西农业生物科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 胰岛素样生长因子Ⅰ 参考标准
• 年，卷（期）: 2006,（z1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种与繁殖
• 页码范围: 10-14
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 3709字
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR的方法利用肝组织提取的总RNA制备猪胰岛素样生长因子Ⅰ(pIGF-Ⅰ)cDNA目的片断,与pMD-18T vector连接成重组质粒,并转化Escherichia coli DH5α.联合应用PCR鉴定、α互补法、限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.测定纯化的重组质粒A260,确定浓度并以此制备实时荧光定量PCR(FQ-PCR)梯度浓度参考标准.结果表明:pIGF-Ⅰ cDNA目的片断成功制备,并获得稳定的重组质粒,保持了目的片断序列的特异性和完整性,成功构建了pIGF-Ⅰ实时FQ-PCR的定量参考标准.