凋亡蛋白融合基因与报告基因pECFP-C1的构建及其稳定表达细胞株的建立

• 作者: 张忠芳 张玉静 李士泽
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 凋亡蛋白融合基因 报告基因pECFP-C1 CHO稳定表达细胞株
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 5292字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.01.001

摘要

利用PCR方法扩增凋亡蛋白融合基因片段,克隆至pMD18-T载体,鉴定和测序正确的凋亡蛋白融合基因亚克隆入带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pECFP-C1的多克隆位点EcoRⅠ和SacⅡ之间,成功地构建带有报告基因的凋亡蛋白融合基因真核重组表达载体pECFP-C1-AFG.将带有报告基因的凋亡蛋白融合基因真核表达载体应用脂质体介导使其转染中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),于转染48 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的出现,对转染的CHO细胞,应用Trizol法提取RNA,经RT-PCR鉴定,转染细胞在750bp处出现目的条带.收集转染细胞上清,应用间接ELISA及Westernblot检测到目的蛋白的表达,说明凋亡蛋白融合基因构建正确.转染凋亡蛋白融合基因重组质粒的细胞,长成单层后传代,经G418(Geneticin)加压筛选(800μg/mL),3周后在荧光显微镜下观察所有细胞均出现绿色荧光,说明已建立了能够稳定表达凋亡蛋白融合基因与报告基因pECFP-C1的细胞株,为进一步研究凋亡蛋白融合蛋白在肿瘤组织中的定位及其诱导肿瘤细胞凋亡打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李士泽	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	108	631	14.0	22.0
3	张玉静	解放军军需大学生物化学教研室	41	247	9.0	14.0
4	张忠芳	北华大学医学院	6	18	3.0	4.0