组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体的构建及其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达

• 作者: 丁一 岳保红 张钦宪 朱晓燕
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型纤溶酶原激活剂 真核表达载体 转化 转染 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 457-460
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 字数: 3091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2006.03.023

摘要

目的:构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)真核表达载体,并检测其在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达.方法:以含t-PA cDNA的质粒PETPFR为模板,PCR扩增目的片段t-PA,HindⅢ和Sal Ⅰ双酶切t-PA,HindⅢ和xhoⅠ双酶切pcDNA3真核表达载体.Sal Ⅰ和Xho Ⅰ的黏性末端互补,体外连接酶切产物,重组体转化感受态JM109细菌,筛选菌落和测序鉴定.以脂质转染胺试剂LipokctamineTM2000将pcDNA3-t-PA转染入乳癌细胞系MCF-7,G418筛选.应用原位杂交技术,以地高辛标记的t-PA cDNA为探针,显示t-PA在MCF-7中的瞬时表达.结果:电泳获得目的片段t-PA的条带2.1kb,初步鉴定为阳性重组体,测序证实为正确的t-PA序列.MCF-7细胞原位杂交显示大部分细胞表达阳性.结论:组织型纤溶酶原激活剂真核表达载体构建成功,可在乳癌细胞系MCF-7中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁一	郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室	66	230	9.0	11.0
2	张钦宪	郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室	126	523	10.0	15.0
3	岳保红	郑州大学第一附属医院检验科	36	98	6.0	8.0
4	朱晓燕	郑州大学基础医学院组织学与胚胎学教研室	29	77	5.0	6.0